|
|
 |
ТОМ 5, СТ. X (стр. -) //
ДИНАМИКА ИНДУКЦИИ ЛЕЙКОЦИТАРНОГО ИНТЕРФЕРОНА ПРИ ОДНОКРАТНОМ И ПОВТОРНОМ ПРИМЕНЕНИИ ПАНАВИРА Колобухина Л.В., Носик Н.Н., Меркулова Л.Н., Брагинский Д.М., Лаврухина Л.А., · Калинина Т.С.,*Стовбун С.В.*, Литвин А.А.*, Сергиенко В.И.* ГУ НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН Москва, 123098, ул. Гамалея, д.16 · ГУ НИИ фармакологии им. В.В.Закусова РАМН Москва, 125315, ул.Балтийская, д.8 *НИИ физико-химической медицины Минздрава РФ Москва, 119, Малая Пироговская, д.1а Адрес для корреспонденции: Россия, 121471 Москва, ул. Петра Алексеева, д.12, стр.23, Стовбуну Сергею Витальевичу. Тел/факс: 440-03-94, тел. 440-65-13 Владелец авторских прав: коллектив авторов
Резюме: Исследовали иммуномодулирующие свойства противовирусного препарата панавир (П) на здоровых добровольцах мужского пола в возрасте 18-21 год. Оценивали интерфероновый статус по уровню сывороточного интерферона (ИНФ) и способности лейкоцитов периферической крови синтезировать ИНФ (a- и g-ИНФ) в ответ на индукцию in vitro соответствующими индукторами ИНФ (ВБН и ФГА через 2, 5 и 24 часа после внутривенных инъекций П (0,004% раствор в ампулах по 5 мл). П применяли в соответствии с двумя режимами введения: 1) внутривенно однократно; 2) внутривенно двукратно, с интервалом 48 часов. Указанные схемы введения П исследовали на одной группе добровольцев с интервалом 7 суток. Разовая (суточная) доза составила 5 мл, курсовая доза - 15 мл. П при однократном и повторном введениях не изменял исходный уровень сывороточного ИНФ, в то время как уровень лейкоцитарного ИНФ возрастал в 1,6-3 раза. Повторное применение П обнаружило характерное для других индукторов ИНФ период гипореактивности. Особенности динамики изменения интерферонового статуса позволяют предположить у П наличие ИНФ-индуцирующей активности.
Ключевые слова: интерферон, культура клеток, вирус, иммуномодулятор Abstract: Interferon producing properties of antiviral medicine panavir (Р) has been studied in heаlthy voluntaries-men of 18-21 ages. Interferon status was estimated by interferon concentration in serum and g -interferon induction by peripheral blood leucocytes under inducer stimulating in vitro. Interferon concentrations were analyzed in 2, 5 and 24 hours after intravenous infusions. Voluntaries were treated according two schedules: 1) acute intravenous infusion and 2) two intravenous infusions separated by time interval 48 hours. Interferon-inducing effects of P were investigated in the same voluntaries under both schedules with a week interval between points 1) and 2). Acute dose per person was 5 ml (containing 200 mkg), course dose - 15 ml (containing 600 mkg). It has been shown that acute and repeated infusions with P failed to influence on the serum interferon levels, while interferon induction by leucocytes increased in 1.6-3 times. Subchronic treatment with P resulted in hyporeactivity period of leucocyte interferon production that to be revealed as a character of known inducers of interferon. Dynamics of interferon concentrations under P treatments suggested interferon producing properties of P. Key words: interferon, cell culture, virus, immunomodulator Важным звеном в системе иммунологической защиты организма являются интерфероны (ИНФ). Функции ИНФ в организме разнообразны, однако наиболее важной из них является антивирусная, которая осуществляется путем стимуляции выработки антивирусных белков в интактных клетках, обеспечивающих в них развитие так называемого антивирусного состояния. ИНФ участвует также в антимикробной и противоопухолевой защите, обладает антипролиферативными, иммуномодулирующими и радио-протективными свойствами [1, 2, 3]. Субстратом терапевтического эффекта индукторов ИНФ являются системы образования эндогенного ИНФ организма. Помимо этиотропного действия, индукторы ИНФ обладают иммуномоделирующими свойствами, что определяет их эффективность в отношении широко круга заболеваний [4, 5]. Результаты исследований показали несомненную перспективность использования индукторов ИНФ для лечения и профилактики острых и хронических вирусных и вирусно-бактериальных инфекций, а также для коррекции расстройств как интерферонового, так и иммунного статуса. В настоящее время есть все основания полагать, что в недалеком будущем область клинического применения индукторов ИНФ будет значительно расширена, и эти препараты смогут, подобно ИНФ, использоваться не только при ОРВИ, герпесе, вирусных гепатитах, ВИЧ-инфекции, но и при вирусных энцефалитах, бешенстве, медленных и смешанных инфекциях, хламидиозах и т.д [4]. Таким образом, поиск в ряду соединений природного и синтетического происхождения новых эффективных индукторов ИНФ является актуальной задачей. Новый отечественный противовирусный препарат создан на основе биологически активных веществ из быстро делящихся клеток растений. Действующая субстанция препарата является растительным биологически активным полисахаридом, который относится к классу гексозных гликозидов. Экспериментальные исследования показали высокую противовирусную эффективность панавира в условиях ин витро в отношении вируса гепатита С (штамм 1b), вирусов простого герпеса 1 (штамм F) и 2 (штамм G) типа, цитомегаловируса (референс-штамм АД 169) [6,7]. В клинической практике препарат показан при вирусных инфекциях у пациентов с нормальной или ослабленной иммунной системой при инфекциях кожи и слизистых, вызванных вирусами герпеса и вирусоносительстве клещевого энцефалита [8]. Целью настоящего исследования является анализ влияния панавира на функционирование системы ИНФ у здоровых добровольцев. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Испытуемыми были 30 добровольцев мужского пола в возрасте от 18 до 21 года. Отсутствие патологических изменений в анализах периферической крови, мочи и при биохимическом анализе крови были основными критериями включения в исследование, проводимое в рамках первой фазы клинических испытаний на безвредность. До начала экспериментов у всех волонтеров была проведена термометрия. Исследуемые были информированы о том, какой препарат им будет вводиться. Исследуемое вещество: биологически активный полисахарид из класса гексозных гликозидов в 0,004% растворе а для внутривенных инъекции в ампулах по 5 мл. Препарат применяли внутривенно в соответствии с двумя режимами введения: 1) внутривенно однократно; 2) внутривенно двукратно, с интервалом 48 часов. Указанные схемы введения панавира исследовали на одной группе добровольцев с интервалом 7 суток. Таким образом, разовая (суточная) доза составила 5 мл, курсовая доза - 15 мл. Интерфероновый статус оценивали по уровню сывороточного ИНФ и способности лейкоцитов периферической крови синтезировать a- и g-ИНФ в ответ на индукцию in vitro соответствующими индукторами ИНФ (ВБН и ФГА). Показатели интерферонового статуса регистрировали до введения препарат, через 2, 5 и 24 часа после применения панавира. Определение уровня ИНФ в сыворотке крови и интерфероновую реакцию лейкоцитов проводили с помощью титрования в культуре диплоидных клеток человека М-19 с использованием микрометода в 96-ти луночных культуральных панелях. Тест-вирусом служил вирус энцефаломиокардита мышей, за единицу активности ИНФ принимали величину, обратную конечному разведению ИНФ, при котором наблюдается 50%-ная защита клеток от 100 ТЦД50 тест-вируса [2]. Результаты титрования проб ИНФ обрабатывали путем
определения средней геометрической; при вычислении оперировали логарифмами
полученных числовых значений. Фоновый
(до введения панавира) уровень
сывороточного ИНФ у всех исследуемых добровольцев был менее 4-х ед./мл,
способность лейкоцитов к продукции a- и g-ИНФ была в пределах нормы (проба "0" Табл. 1 и 2). При
однократном введении панавира исходный уровень сывороточного ИНФ не изменялся.
Динамика лейкоцитарного ИНФ
характеризовалась определенными колебаниями. Так, через 5 часов после однократного применения панавира
регистрировали 3-х кратное снижение уровня a-ИНФ, а
через 24 - часа 3-х кратное превышение его контрольного уровня. Увеличение
продукции g-ИНФ (в 2,7 раза)
обнаруживалось уже через 2 часа после однократного введения панавира. Через 5
часов после однократной инъекции препарата уровень концентрации g-ИНФ возвращался к исходным показателям, а через 24 часа
опять возрастал в 2,8 раза. Таким образом, основными
особенностями ИНФ-индуцирующей активности панавира при однократном применении являются: 1) увеличение концентрации
ИНФ в 2,7-3 раза по сравнению с фоновым уровнем, что соответствует
терапевтическим дозам ИНФ; 2) сохранение повышенного уровня ИНФ через 24 часа
после инъекции; 3) некоторые различия в динамике индуцирующей активности
препарата в отношение a- и g-ИНФ. В целом, сходную динамику индукции ИНФ наблюдали при повторном применении панавира (Табл.2).
Так, в сыворотке крови после повторного
введения панавира ИНФ не определялся.
Через 2 и 5 часов после второй инъекции препарата отмечалось некоторое
снижение ИНФ-индуцирующей активности лейкоцитов с последующим ее усилением
через 24 часа. Однако при повторном введении панавира ( через 7 суток
после первого применения - 0/1доза)
концентрации a- и g-ИНФ, определяемые через 24 часа после инъекции, превышали
фоновый уровень всего лишь в 1,6 раза (по сравнению увеличением в 2,7-3 раза
при однократном введении) . Увеличение
индукции ИНФ в 2,7 раза по сравнению с
контрольным уровнем регистрировали через 24 часа после повторного введения
панавира (0/2доза). Следует отметить, что второй режим применения панавира
исследовали при несколько пониженном уровне (в 1,7-2,3 раза) фоновых параметров
продукции лейкоцитарного ИНФ, что может быть следствием однократного применения
препарата (Табл. 1 и 2). Таким
образом, при повторном применении
панавира отмечается период гипореактивности (или рефрактерности) в отношении его ИНФ-индуцирующих свойств. Данные литературы
свидетельствуют, что подобные свойства характерны, в целом, для индукторов ИНФ: после воздействия на клетку
индуктора ИНФ в ней возникает состояние рефрактерности или гипореактивности к
повторному воздействию того же вещества, сохраняющееся, как правило, 2 - 3 дня [3]. Механизмы
этого явления до конца не изучены. На модели фибробластов, преимущественно индуцирующих b-ИНФ, было показано, что индукторы активируют синтез не
только м-РНК самого b-ИНФ, но
и м-РНК белка-репрессора трансляции. Последний, достигнув определенных
концентраций, инактивирует м-РНК ИНФ, и тем самым подавляет синтез ИНФ.
Состояние рефрактерности после стимуляции синтеза a-ИНФ, связано с другими механизмами. Предполагают, что его
вызывают интерлейкины (ИЛ) отрицательного контроля синтеза a-ИНФ (ИЛ-4, ИЛ-10).
Важно подчеркнуть, что независимо от конкретного механизма развития
рефрактерности после воздействия индуктора в норме клетка сохраняет
чувствительность к другим индукторам. Полагают, что a- и g-ИНФ выполняют различные
функции, воздействуя на разные звенья иммунной защиты организма.
Разнообразные иммунорегуляторные процессы опосредуются g-ИНФ. Собственно противовирусная активность этого типа ИНФ
ниже, чем у a- и b-ИНФ, для которых противовирусное действие является
основным [4]. Результаты настоящего исследования свидетельствуют о
наличии у панавира свойств индуктора a- и g-ИНФ.
Эти результаты согласуются с экспериментальными и клиническими данными о
наличии у панавира как противовирусной активности, так и способности повышать
неспецифическую резистентность организма в отношении широкого круга
инфекционных агентов. Дальнейшие исследования требуются для определения
оптимальной схемы применения препарата
в качестве индуктора ИНФ и детального
анализа особенностей его ИНФ-индуцирующей активности. Выводы 1. При однократном применении панавир увеличивает уровень
лейкоцитарного ИНФ в 2,7-3 раза, что соответствует терапевтическим дозам
препаратов ИНФ. 2. При повторном примении панавира наблюдается период
рефрактерности в отношении его ИНФ-индуцирующей активности. 3. Динамики индукции лейкоцитарного ИНФ имеет двуфазный характер. 1.
Баринский И.Ф., Бикбулатова Р.М. Герпесвирусные инфекции
(диагностика и лечение). М., 1990, С.77-81. 2.
Ершов Ф.И. Система интерферона в норме и при патологии.
М., Медицина, 1996, 240 С. 3. Ершов
Ф.И. Интерфероны. Вопр. Вирусол. 1998; 6: 247-252 . 4.
Ершов Ф.И. Этиотропная терапия
наиболее распространенных вирусных
инфекций, Вестник РАМН 2001; 11:
34-39. 5. Ершов Ф.И.,
Тазулахова Э.Б. Индукторы интерферона -
новое
поколение иммуномодуляторов, Вестник РАМН. 2001; 4: 52-56. 6.
Дерябин Г.Г., Исаева Е.И., Литвин А.А., Стовбун С.С. и др.
Действие
препарата "Панавир" на экспериментальную инфекцию, вызванную
вирусом гипатита С в культурах клеток.
Инфекции, передаваемые половым путем. 2003; 3: 31-33. 7.
Климова Р.Р., Федорова
Н.Е., Козлов А.Ю., Меджидова М.Г. и др.
Влияние препарата "панавир" на
течение герпесвирусных инфекций in
vitro. Вестник дермаологии и венерологии.
2004; 6: в печати. Инфекции передавамые половым
путем, в печати 8.
Масюкова С.А., Кожушков А.И., Поспелова О.Л., Гладько О.В.
и др. Клиническое изучение эффектов препарата "Панавир" при лечении генитального герпеса. Вестник последипломного медицинского образования. 2002; 4:14-16. Таблица 1. Интерфероновый статус у добровольцев, получивших 1 дозу
панавира Интерфероновый
статус у добровольцев, получивших 2 дозы панавира через неделю после первой
дозы. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Articles
